动物模型的选择:
选择适当的实验动物,一般是小鼠或大鼠,取决于研究问题和模型的可行性。
这两点是完全摘抄了基础理论部分,属于是课题实验的总纲,没什么特别的意义。
更重要的是下面。
确定HK2基因敲除的具体方法!
常见的包括CRISPR/Cas9技术、基因敲除小鼠的胚胎干细胞等。
只一句话,难度一下子就上来了。
CRISPR/Cas9技术,是一种基因编辑技术,编辑基因,就需要依靠这种技术,但是如何敲除,而且要在敲除后,得到基因小鼠的胚胎干细胞,一下子就变得迷离起来。
试验动物在进行了动物试验后,无法再繁殖,但不代表,实验动物模型从一开始,就是完成体。
这需要在小鼠受精后的胚胎干细胞阶段,就得将它们取出,进行基因编辑。
然后的操作步骤是:
设计基因编辑工具、基因编辑体外实验:
在体外对胚胎干细胞或其他适当的细胞进行基因编辑,验证编辑工具的有效性。
基因编辑体内实验:
将编辑过的胚胎干细胞或基因编辑工具引导到动物体内,通常是小鼠或大鼠的胚胎。
筛选正常的基因编辑体:
通过分子生物学技术,如PCR、Southernblotting等,筛选出成功敲除HK2基因的动物。
动物繁殖:
利用成功编辑的胚胎培育出整个基因敲除的动物,通常是通过繁殖和筛选产生基因敲除体的后代。
验证基因敲除效果:
对产生的基因敲除体进行详细的分子生物学和生化学分析,确认HK2基因是否被成功敲除。
这些看起来不可能,难度特别高的实验操作,方子业如今对其一一进行回顾时,觉得难度也不算特别高了。
至少啊,看起来,不是之前看它们那样,觉得就只是空中楼阁,如梦幻泡影,稍微显得更加实质化。
这是方子业通过自己的能力,得到了实验操作可行性的反馈。
既然想了,那就去做啊。
每一个步骤,还需要详细化,比如说联系大型的动物实验公司,问他们是否可以提供胚胎干细胞的提取技术,如果不能提供的话,是否可以提供实验操作的平台和地址,自己亲自去操作。
如果可以提供,那么他们如何转运,转运到哪里,这些都是问题。
这可不是普通的动物实验,找一个动物实验室就直接做了,方子业怀疑,自己很有可能得回汉市,甚至飞魔都和京都,或者是飞羊城,这样经济发达,且医疗技术水平和位于国内科研前沿的地方。
但不管怎么样,万事开头难,有了想法后,至少是有这样的底气,去做这件事。
方子业联系了一下之前师父袁威宏带自己去过的,汉市的那家大型动物试验中心。
工作人员马上说问一下。